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实用专题:解冻过程中,发现细胞存活率低该如何解决?

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发表于 2017-9-6 15:29:55 | 显示全部楼层 |阅读模式
在解冻冻存细胞时,发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题, 是什么原因导致,该怎么进行解决?现在我们大家一起往下看吧。或许能给您的实验问题的解决找到答案!

低存活率
出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下:
1.解冻过程中细胞裂解
推荐的解决方案:可预期到一定量的细胞死亡,因此细胞的浓度应足够高,考虑到这一损失。起始浓度为106至107细胞/毫升。
2.解冻过程中的问题
推荐的解决方案:在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物,保存时间为1-5天,但这不是保存的首选方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养。
3.对冷冻液过敏
推荐的解决方案:A.完全或部分更换培养基,减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。
B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物,取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的最佳条件在对数期。
4.被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄
推荐的解决方案:解冻最近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长,存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。

大量细胞碎片
出现大量细胞碎片的可能原因及推荐解决方案如下:
1.冷冻时细胞密度过低
推荐的解决方案:缩短解冻过程中的时间。将细胞取出后,立即将冻存管浸入在37℃的水浴中,并震荡至全部融化,然后迅速地转移到预热的培养基中。
2.不适当的冷冻过程
推荐的解决方案:解冻不同冷冻室总的试管。确保在冻存过程中采用的适当的技术,并确保使用了适量和适合的冷冻液。

生长缓慢
出现生长缓慢的可能原因及推荐解决方案如下:
1.培养瓶的大小
推荐的解决方案:一些细胞在培养基中倾向于维持一定的密度。将培养物转移到较小的培养瓶中,使细胞密度上升;如,根据培养基的体积,从75cm2的烧瓶转移到2或3个25cm2的烧瓶中。
2.细胞密度过低
推荐的解决方案:提高未来冷冻物种细胞的冻存密度,或使用较小的培养容器,或解冻多个试管来进行培养。

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