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5种常见的PCR误读正解

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发表于 2017-9-11 14:37:42 | 显示全部楼层 |阅读模式
导读
有些科研君在解读PCR数据时,经常会发生一些误读。本文在此列举5种常见的PCR误读,并揭示其正解到底是什么。)

01
“特异性”和“保真度”意思是相同的

高特异性PCR将只生成针对目标靶点序列的单一扩增产物。
高保真度(即高度准确的) PCR将含有极少量的DNA聚合酶-减少产物中的错误。

02
所有的dNTP都是一样的
要成功完成PCR,反应混合物中应使用高度纯化的dNTP。并非所有供应商均提供PCR级的dNTP,污染的杂质会降低扩增的灵敏度和产物的产量。

03
PCR量越多越好
如果您在琼脂糖凝胶中检测到非特异性的PCR条带,则应减少DNA模板、引物、Taq聚合酶或MgCl2用量,以提高特异性。

04
如果退火温度在45°C至55°C之间,则大多数PCR反应可发生
严格的Tm优化可以获得最高的产量。不恰当的Tm则会导致非特异性产物形成且产量下降。

05
采用任何Taq聚合酶均可
在PCR设置过程中会发生错配或形成引物二聚体,因此应使用热启动Taq聚合酶。在高温下,引物退火的严格性提升,且几乎不会出现错配。
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